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小鼠肺組織單細(xì)胞懸液經(jīng)過一系列染色處理后，在BD Celesta流式細(xì)胞儀上呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞亞群分布圖，B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被不同熒光標(biāo)記區(qū)分開來。
小鼠作為常用的實驗動物模型，在免疫學(xué)、腫瘤學(xué)和發(fā)育生物學(xué)研究中占據(jù)核心地位。對小鼠免疫系統(tǒng)進(jìn)行精準(zhǔn)解析，流式細(xì)胞術(shù)是至關(guān)重要的技術(shù)手段，而抗體試劑的質(zhì)量與選擇直接影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
01 BD流式抗體技術(shù)平臺與優(yōu)勢
BD Biosciences作為流式細(xì)胞術(shù)解決方案提供商，開發(fā)了完整的技術(shù)平臺，包括獨特的熒光染料系統(tǒng)、抗體驗證流程和配套試劑。
BD Horizon Brilliant系列染料是其核心創(chuàng)新之一，如BV421、BV510、BV605、BV650、BV786等，這些染料具有更高的熒光強度和更好的光譜分離性，使多色流式實驗（如同時分析10個指標(biāo)）成為可能。
BD Pharmingen品牌抗體經(jīng)過嚴(yán)格驗證，確保批間一致性和特異性。BD還提供完整的配套試劑，如FcR阻斷劑、固定破膜試劑和染色緩沖液，形成完整的實驗工作流程。
針對小鼠細(xì)胞表面標(biāo)志物篩選，BD推出了Lyoplate™篩選系統(tǒng)，這是一個預(yù)格式化的96孔板抗體集合，便于快速篩查和鑒定小鼠細(xì)胞表面抗原表達(dá)。
02 小鼠主要免疫細(xì)胞亞群的BD抗體選擇
合理搭配不同熒光標(biāo)記的抗體是流式實驗成功的關(guān)鍵。下面按細(xì)胞類型分類，列出常用的BD小鼠流式抗體。
泛白細(xì)胞標(biāo)記抗體是實驗的起點，用于圈定免疫細(xì)胞群體：
| 抗體特異性 | 熒光標(biāo)記 | 克隆號 | 貨號 |
|---|---|---|---|
| CD45 | Alexa Fluor 700 | 30-F11 | 560510 |
| CD45 | APC-Cy™7 | 30-F11 | 557659 |
| CD45 | APC-R700 | 30-F11 | 565478 |
T細(xì)胞及其亞群的深入分析需要多個標(biāo)志物組合。T細(xì)胞研究中需要區(qū)分不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如初始T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。
| 抗體特異性 | 熒光標(biāo)記 | 克隆號 | 貨號 | 主要用途 |
|---|---|---|---|---|
| CD3ε | FITC | 145-2C11 | 553061 | T細(xì)胞總標(biāo)記 |
| CD4 | PerCP-Cy™5.5 | RM4-5 | 550954 | 輔助T細(xì)胞標(biāo)記 |
| CD8 | PerCP-Cy5.5 | 53-6.7 | 560662 | 細(xì)胞毒性T細(xì)胞 |
| CD25 | BV605 | PC61 | 563061 | T細(xì)胞活化/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 |
| Foxp3 | Alexa Fluor 647 | MF23 | 560401 | 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核內(nèi)標(biāo)記 |
| CD44 | PE | IM7 | 553134 | 記憶/效應(yīng)T細(xì)胞 |
| IL-17A | BV786 | TC11-18H10 | 564171 | Th17細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子 |
B細(xì)胞、NK細(xì)胞和髓系細(xì)胞的鑒定則需要另一套標(biāo)志物組合。這些細(xì)胞在固有免疫和適應(yīng)性免疫中扮演不同角色，需要多參數(shù)同時檢測以準(zhǔn)確區(qū)分。
| 細(xì)胞類型 | 抗體特異性 | 熒光標(biāo)記 | 克隆號 | 貨號 |
|---|---|---|---|---|
| B細(xì)胞 | CD45R/B220 | PE | RA3-6B2 | 553089 |
| B細(xì)胞 | CD19 | PE-Cy7 | 1D3 | 560728 |
| NK細(xì)胞 | NK-1.1 | APC-Cy7 | PK136 | 560618 |
| 單核/巨噬細(xì)胞 | CD11b | FITC | M1/70 | 557396 |
| 巨噬細(xì)胞 | F4/80 | BV421 | T45-2342 | 565411 |
| 樹突狀細(xì)胞 | CD11c | PE-Cy7 | HL3 | 558079 |
| 樹突狀細(xì)胞 | CD86 | BV650 | GL1 | 564200 |
| M2巨噬細(xì)胞 | CD206 | Alexa Fluor 647 | MR5D3 | 565250 |
| MHC II類 | I-A I-E | BV605 | M5/114.15.2 | 563413 |
03 應(yīng)用實例：小鼠組織多色流式分析
在實際研究中，科研人員通常需要根據(jù)組織類型和研究問題設(shè)計特定的抗體組合。例如，江蘇省疾病預(yù)防控制中心在2024年的采購需求中，就包含了多種BD流式抗體用于免疫分析研究。
針對小鼠肺組織免疫細(xì)胞的全面分析，可以采用10色方案同時檢測B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
該方案使用了BD Celesta流式細(xì)胞儀（3激光12色配置），涵蓋了從活死染色（Fixable Viability Stain 510）到各種細(xì)胞表面標(biāo)志物的完整檢測體。
對于小鼠脾臟免疫細(xì)胞的深度分析，9色方案可以同時解析初始T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞、Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。
這種方案需要結(jié)合表面標(biāo)記染色和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子檢測，因此需要使用BD的Transcription Factor Buffer Set等破膜固定試劑。
04 實驗設(shè)計與優(yōu)化要點
進(jìn)行多色流式實驗時，有幾個關(guān)鍵因素需要考慮。光譜重疊與補償調(diào)節(jié)是多色流式實驗的基礎(chǔ)，必須為每個熒光染料設(shè)置單陽管，使用BD CompBeads或?qū)嶋H細(xì)胞樣本進(jìn)行補償調(diào)節(jié)。
Fc受體阻斷對減少非特異性結(jié)合至關(guān)重要，特別是在檢測髓系細(xì)胞時，可使用小鼠CD16/CD32抗體（貨號553141）進(jìn)行預(yù)處理。
熒光染料搭配原則應(yīng)遵循亮度匹配原則，將最亮的熒光染料（如BV421）用于表達(dá)量最·低的標(biāo)志物，將較暗的染料用于高表達(dá)標(biāo)志物。
當(dāng)同時使用兩種或更多BD Horizon Brilliant染料時，必須使用BD Horizon Brilliant Stain Buffer（貨號563794）以最小化染料間的相互作用。
BD還提供CBA（Cytometric Bead Array）技術(shù)平臺，用于同時檢測多種可溶性蛋白如細(xì)胞因子、趨化因子等，適用于小鼠樣本的有27種因子，包括IFN-γ、IL系列、TNF、MCP-1等。
隨著流式技術(shù)的不斷發(fā)展，BD推出的光譜流式細(xì)胞儀進(jìn)一步提升了多色檢測能力。一位研究人員在對小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞進(jìn)行分析時，使用包含CD3、CD19和CD49b抗體的篩選面板排除了T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞的污染，確保了對目標(biāo)細(xì)胞群的準(zhǔn)確分析。
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